怎样提取豆类中的蛋白质

怎样提取豆类中的蛋白质 该如何做会好

2014/7/11 14:45:05提问者:小班 | 分类:大豆 | 状态:未解决 | 浏览量:235
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  • 黄豆磨浆是典型的蛋白质提取法,许多豆制品都是以豆浆为原料的。当然,工业提取蛋白质的技术更高了。
    2014/7/11 14:45:27回答者:小班
  •     一、植物组织蛋白质提取方法
        1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
        2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
        3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
        4、提取上清夜,样品制备完成。
        蛋白质提取液:300ml
        1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
        2、甘油(Glycerol)75ml
        3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
        这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
        二、植物组织蛋白质提取方法
        三氯醋酸—丙酮沉淀法
        1、在液氮中研磨叶片
        2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
        3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
        4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
        5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
        药品:
        提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
        裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
        这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
    2014/7/11 14:45:20回答者:小班